作者：小小鱼虾
但凡想要拿到其中一個，都需要足夠的積累。
當然，但凡能夠拿到一個，也能讓人功成名就，幾百萬的課題經費是小菜一碟，數千萬的科研基金，也是很常見的。
而這樣的一個項目啓動資金，是袁威宏目前拿下的青年基金的百倍有餘。
再要說什麼的時候，外面做完檢查複缘牟∪耍呀浲崎_門。
袁威宏就不再說話，方子業也是趕緊開始薅自己的學識點，一步一步地進行閱片審視，精準詳鄟K用藥，然後得到了0.9的學識點。
美滋滋地開心起來。
因爲即便是中南醫院，也不是那種疑難雜症遍地走的，疑難雜症自然不少，可也有簡單的病種，病人掛號的時候，可不會考慮浪費資源這樣的說法。
門酝辏阶訕I就又得到了15點左右的學識點，這一下，即便是加點打結術到了3級，給老師送禮物。
學識點的餘額，一下子又累積到了60之多，還可以增加一個3級技能的同時，今天晚上，方子業還有細胞實驗，即將收穫，到時候觀察結果，肯定又是一筆不菲的學識點。
“師父，我先放白大褂，然後去實驗室了啊！”
“好，WB好好跑。”袁威宏交待，彷彿是在給方子業暗示，方子業在做什麼，他都瞭然於心。
方子業點了點頭，加快了腳步。
做實驗、搞錢、發文章、學識點，充實且快樂。
WB是縮寫，蛋白質免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上，然後利用抗體進行檢測的方法。
一個基因表達終極結果是產生相應的蛋白質(或酶)。方子業研究的HK2，其實就是生物化學糖酵解過程中的第一個限速酶己糖激酶，而HK2則是己糖激酶的縮寫，己糖激酶是催化己糖使之磷酸化的酶，它是糖酵解途徑的第一個酶，也是糖酵解途徑的絕對限速酶。
兴苤墙徒馐翘寝D化爲能量的第一步，沒有糖酵解的第一步，葡萄糖和果糖想要被正常利用，是幾乎不可能的事情，而如果依靠酮體等旁路作爲有氧氧化的底材，肯定無濟於事。
因此定量檢測HK2的含量，在骨鉅細胞瘤經過過表達、沉默後的絕對數量，是檢測HK2在骨鉅細胞瘤發展過程中作用的一個定量證據。
Western Blot採用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。
經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作爲抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分……
原理聽起來頗爲複雜，但其實真正要操作的時候，主要的步驟主要是以下幾步。
試劑準備，也就是讓蛋白質跑的跑道，需要聚丙烯酰胺凝膠電泳來提供。
然後是參賽的邉訂T，是把腫瘤細胞裂解之後，使得內部的蛋白質充分釋放，然後製作了標準曲線。
製作標準曲線之後，就可以讓自己處理的細胞產生的‘邉訂T’開始上賽道了。
緊接着是電泳、轉模、免疫反應、顯影等等一系列後，通過特殊的抗體和試劑，就能夠顯示目標蛋白的膠片。
將膠片進行掃描或拍照，用凝膠圖象處理系統分析目標帶的分子量和淨光密度值……
這個過程很複雜，也相對漫長，更需要耐心。
不過，方子業反正已經下了門裕瑏淼綄嶒炇已Y，就一步一步地按部就班來做。且旁邊還有洛聽竹幫點小忙。
最後呈現出結果後，洛聽竹欣喜異常：“方師兄，你今天這個條帶顯示很清楚欸，上一次範師兄跑出來的是啞鈴狀的。”
說完，她偏頭看向方子業的成片，條帶清晰、沒有雜帶、背景乾淨！
“呈啞鈴狀一般配置膠有問題，另外還有一種可能是樣品中含有太多雜質，沒有離心下來，然後雜質沉積在孔的中間，蛋白自然被推擠到兩邊。”
“配好膠，不合格的堅決不用，不要鋌而走險。”方子業仔細想了一下原理，如此給洛聽竹解釋。
“那如果有條帶拖尾呢？”洛聽竹想了一下，又問了一個問題，應該是她跟着別人做的時候，看到過這樣的情況。
“條帶拖尾的話，一般是蛋白量濃度高或者，孵一抗濃度和時間太長。”
“蛋白含量高的話，可能是前期的文獻準備沒有確定好，我認爲最有可能的是因爲一抗濃度太高，作用時間太長引起。”
“當然也有其他原因。”方子業再次看了看自己的成片。
HK2與β-actin（肌動蛋白）內參兩個條帶，共有過表達、正常以及沉默三個組。
腫瘤細胞實驗的內參，特別是涉及糖酵解通路的細胞實驗內參，是不能選用常見的GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）的。
“你這張圖，直接用prism進行作圖就可以用了吧？”洛聽竹繼續問。
“應該差不多吧，條帶的厚度灰度差距還是蠻明顯的。拍個照，拍個照……”方子業趕緊讓洛聽竹也幫忙拍一張。
洛聽竹欣然答應，靈動得如同一隻勤勞的小松鼠。
而方子業此時，看着學識點飛速跳動到了134，一下子增加了足足七十點的學識點，也是知道啊，這一次的WB實驗，在這一個課題之中的作用佔比不小，可能是支撐整個課題規模的小骨架了。
“這張照片拍得怎麼樣？”洛聽竹拍完後，問方子業。
方子業泛出姨母笑，而洛聽竹則以爲自己拍照的水平還不錯，於是又咔咔地來了幾張。
然後就是清理實驗臺並清洗相應的實驗器材了。
一切結束，方子業建議：“洛師妹，辛苦了，一起去喫個宵夜吧？”
洛聽竹這會兒正在左右翻看着WB成圖的照片，歪着頭點了一下：“好呀。”
……
第69章 最熱心的人（求收藏，求追讀）
時間已經接近十一點半，不算早了。
且這個點，在中南醫院附近是沒什麼喫東西的了，需要去到漢街的另外一頭，纔可能有宵夜。
但說好既定，兩人從實驗室出來時，都不必關燈，仍有人在裏面辛勤工作，每個人的實驗進度，都各自有差異。
方子業給洛聽竹講了袁威宏同意暫時讓洛聽竹來幫忙他做實驗的事情，雖然沒有太大的貢獻和成果，但能夠跟着學習，這樣的機會就不容錯過。
洛聽竹與方子業二人走出實驗室後，洛聽竹才問：“方師兄，你現在WB都做完了，你後續還要做什麼實驗嗎？”
方子業目前已經進展的實驗有遷移、侵襲、CCK-8增殖，週期檢測以及WB的HK2定量分析，在基礎實驗方面的話，只是在HK2這個分子酶分子層面，已經可以告一段落。
自然，這只是最前期的實驗，與其相關可做的事情還有很多。
“目前主要有兩個可探索的方向，一個是看能不能找到對HK2有影響的藥物，對腫瘤的生長侵襲等產生作用，另外一個是，繼續深入尋找HK2的靶點，這是後續課題的一個延展方向。”
“再就是動物實驗了，我們只打算做皮下載瘤和骨內載瘤兩組。”方子業不怕把後續的延展方向告訴給洛聽竹。
因爲啊，即便是洛聽竹用這個東西去申請後續課題，但是這個課題的前期實驗研究，不是洛聽竹做的，所以洛聽竹即便依託於鄧勇教授，也未必能夠爭得過方子業和揭翰兩人。
袁威宏這個組，有前期研究基礎，兩個人的底蘊都不一樣。
洛聽竹聞言便問：“奧，那應該就是後續可進展的實驗和項目了吧？”
申請項目的時候，一定要注意可延展性，現在方子業只做到了分子層面，可延展性不要太多。之前袁威宏也是考慮到了這一點，才申請了這個方向。
是一個可以後續進展很深入的龐大體系。
就是已經證明了HK2在骨鉅細胞瘤裏面有用，那麼一切對HK2有作用的相關因素，都可以參與到骨鉅細胞瘤的控制當中來，其他人沒有做過，至少是沒有證明是通過HK2對骨鉅細胞瘤產生的影響的話，所有的東西，都可以做。
雖然這樣未必能夠解決骨鉅細胞瘤的化療藥物，但是，每一種腫瘤的化療藥物，都是通過這樣的一步一步摸索，千路萬徑尋找出來的，不可能一蹴而就。
“應該是的，車到了洛師妹。”
“你坐後座，我坐副駕駛。”方子業說完就要去拉開車門。
洛聽竹想了一下，就邀請說：“方師兄，伱跟我一起坐後面唄，我還想問方師兄一些問題。”
方子業並未拒絕。
在車上的時候，洛聽竹沒有方便問，但是下了車，找了一個燒烤攤，點好單後，洛聽竹就問了一下，她打算做的骨肉瘤相關的通路的可行性。
洛聽竹打算申請的課題通路，是mrna骨肉瘤與PKM相關通路的作用和影響。
這樣的實驗，其實比方子業現在做的HK2與骨鉅細胞瘤，更加深入一層，相當於是要在mRNA上進行處理，看它對PKM的影響。
這就類似於，你處理別人的父母，觀察對別人孩子的影響，通俗理解是這樣，當然真實的原理，肯定不是這個道理。
方子業就說：“PKM是一條熱門通路，你要找一條非常合適的mRNA纔行，不然的話，很難讓人眼前一亮。”
“而且，骨肉瘤，也是目前骨科腫瘤裏面，最熱門的話題。”
“當然，肯定能做，只要你能夠找到足夠的文獻來支撐的話，那麼這條通路，也能做下去。”
目前，關於腫瘤化療的研究進展，進入了超級的平臺期，已經四十年來，沒有再有巨大的突破和建樹。
全世界所有的研究人員，都在辛勤耕作和試探，萬一取得突破，那一夜暴富和一夜成名，壓根不愁。
只是吧，這個機遇是很難遇到的，相當於是大海撈針。
你也做通路，我也做通路，大家都看誰邭夂谩�
沒有突破性的進展，就只能是積攢基本功，沿着自己的研究路線，深入下去，一層層剝開通路以及通路上下游的奧祕，能夠把自己所做的細胞系，所做的通路，做成最集大成者，也是一種學術貢獻。
別人也會認可你的能力和實力，未必真要直接做出一種非常成熟的抗腫瘤藥物。
想要一蹴而就，無異於太監嘮嗑，無稽之談。
“洛師妹，其實如果你覺得骨肉瘤太過熱門的話，選擇一種比較偏門一點的腫瘤來申請課題，也是一種不錯的選擇。”
“沒必要格外往最熱門的通路里面擠。”方子業給洛聽竹建議了一條退路。
“那倒也是。謝謝你啊師兄，實驗室裏的人都說，你是最熱心腸的。”洛聽竹笑了笑，沒有答應，也沒拒絕。
雖然是博士，但是她這樣博士，因爲積累的時間不夠，雖然早畢業，但也早就業，因此還需要進一步增厚自己的底蘊。
有足夠的成果，纔是展現自己科研能力的一種標杆……
方子業則沒回話，心說，如果我不是做實驗的時候，有利可圖，我也不會這麼大方啊，其實幫忙做點實驗，自己還能蹭點試劑，還能夠得到學識點，這樣的快樂纔是根本。
夜宵後，方子業把洛聽竹送到了學校門口，就告辭了，沒有更進一步的往宿舍方向送，到了學校裏面，有保安看守着，還是算相對安全的。
返到家裏之後，方子業就趕緊洗洗睡，看着誘人的，高達三位數的學識點，方子業也一時間不知道該從何加點爲好。
先留着唄，萬一後面有用呢？只要不着急用的話，先攢一攢，加點一個4級技能去，奔着博士出關練功房的標準去對標吧。
但想起鄧勇教授畫的餅，方子業也是稍微有點頭疼。
創傷外科練功房801，真正的出關標準，就是博士生出關的標準，出關後，就有非常大的留院機會。
在袁威宏這一屆，就是出關就留院，但現在越來越卷，出關要留院，還得科研有一定能力纔行。
縫合術的皮凍縫合、切開術的豬肉解剖學分離、清創術的碾壓後豬肉成形、肌肉縫合、截骨術、骨折手法復位術，骨缺損的拼接技術、骨成形術、骨瓣設計……
鄧勇教授嘴裏的提前畢業這餅畫得？
第70章 守家（求收藏，求追讀）
隨着骨科年會COA的接近，孫紹青師兄的畢業也無限臨近，再加上，最近校招、找工作的跟班考覈等也接近。
方子業這樣已經是絕對可以讀博的碩士三年級學生，就沒有操作機會可言了，基本上，所有臨牀上的操作機會，都是孫紹青的，就是博士二年級一年級的王元奇等人，都得看着。
自然，不管怎麼樣，十一月中旬如期而至，COA的日期，也是抵達。
科室裏的人，少了一半多。
鄧勇教授肯定要去啊，他還是一個分會場的大會主席，有兩場報告要作彙報，不能缺席。
謝晉元副教授也要去，他是一個分會場的邀請嘉賓，其實就是被大大佬帶着玩的中青年骨幹。
袁威宏也要去，袁威宏目前也是青年骨幹，雖然說，在大會場裏面，沒有一席之地，但是在青年會場，袁威宏還是要展現一下自己的，有一個講課彙報，是關於骨缺損治療的。
中南醫院的創傷外科，骨不連的治療，是一大特色。
再留下的，就只有秦葛羅主治醫師守家了。
博士師兄裏面，孫紹青師兄本來是打算去的，但是正好與浙大附屬醫院的招聘衝突了，所以現在要去浙省拼一把。
王元奇師兄跟着去了，顧毅師兄沒去。
李源培也是再一次出去搞博士的申請考覈了，也是缺席。然後碩士二年級的師弟的話，就是鄧勇教授的學生，舒朗留了下來，謝晉元副教授把自己的學生龔子明帶了去。
一年級的揭翰和朱允炆，則是都去了會場。
如此一來，鄧勇教授組留下來的，就是秦葛羅、顧毅、洛聽竹、方子業、舒朗和蘭天羅，一個主治五個小卡拉米。
年會一共持續五天，從週三到週日。
週三，正好是衝突袁威宏的一個門匀眨沟梅阶訕I鬱悶足足半天，這可是好幾十點學識點啊。
不過，雖然是丟失了門匀盏膶W識點，但是，因爲科室裏的大佬空缺，導致秦葛羅開始發力。
從週二的晚上，秦葛羅就開始尋索一些普通的骨折患者，並且讓總住院金宏洲啊，也接砸恍┬搨M到科室裏來做。
反正牀位空着也是空着，就撿着能做的，之前中南醫院不要的病人做。
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